机构用户解决方案

产品选择指南

一般PCR相关制品

PCR Enzyme的选择 PCR原理说明 Takara优选酶多功能酶高保真酶：PrimeSTAR系列基本PCR：Taq系列 Powerful PCR：MightyAmp系列直接电泳的酶制品特殊用途：多重PCR，防污染等高端PCR酶（Clontech） DNA PCR相关制品 RNA PCR相关制品 PCR Subtraction相关制品 PCR仪器
等温扩增相关制品

等温扩增酶
定量PCR相关制品

qPCR学习中心 qPCR套装反转录反应（qPCR专用）反转录反应试剂(Clontech) 嵌合荧光法检测(Takara) 嵌合荧光法检测(Clontech) miRNA 嵌合荧光法检测探针检测 Cycleave探针检测 qPCR－仪器 qPCR Primer qPCR－RNA/DNA的制备
cDNA合成 & 克隆

克隆学习中心 DNA Ligation TA克隆和平滑末端克隆 In-Fusion无缝克隆 cDNA合成&文库构建 SMART全长cDNA合成&文库构建 Random Mutagenesis Site-Directed Mutagenesis 基因组DNA序列调取试剂盒 Vector（克隆用）感受态细胞修饰酶/Ligases 修饰酶/磷酸酶、激酶修饰酶/DNA & RNA Polymerase 修饰酶/焦磷酸酶修饰酶/RTase、RNase Inhibitor 修饰酶/核酸酶、拓扑异构酶 Nucleotide Buffer（Powder）etc. 用于mRNA生产的酶（HQ级） Others（基因工程相关制品）
NGS相关制品

NGS 学习中心单细胞 RNA-Seq 单细胞 DNA-Seq RNA-Seq DNA-Seq 生殖健康表观遗传学分析免疫库分析单细胞分选系统 NGS关联制品 PCR酶（NGS用）前代RNA-Seq/DNA-Seq制品
自动化系统

自动化学习中心高通量单细胞分选系统ICELL8 cx 及其应用高通量Real-Time PCR系统自动化NGS文库制备系统高通量单细胞分选系统ICELL8应用
核酸提取、纯化及DNA标记

DNA片段、质粒DNA纯化基因组DNA纯化试剂(柱式法) 基因组DNA纯化试剂(试剂型) RNA提取、纯化试剂(柱式法) RNA提取、纯化试剂(试剂型) RNA保存试剂 Small RNA提取试剂体液样品exosome提取试剂病毒核酸纯化试剂盒酵母核酸纯化试剂盒核酸提取及纯化制品-Others DNA标记标记DNA-蛋白质的回收
限制酶

限制酶基本信息常规限制酶系列产品 QuickCut限制酶 RNA限制酶
电泳相关制品

核酸染料 DNA Markers RNA Markers 蛋白质Markers Agarose Loading Buffer 常用缓冲液方便装电泳相关装置
蛋白质互作研究（酵母杂交系统）

Takara酵母杂交学习中心 Matchmaker^® Gold酵母双杂系统 Matchmaker^® Gold酵母单杂系统互作的确认和评价 Matchmaker相关制品
表达调节及蛋白质性能分析

iDimerize^™蛋白质互作诱导系统 ProteoTuner^™蛋白质调节系统 Tet诱导表达系统
蛋白质表达相关制品

E.coli蛋白质表达 Brevibacillus/Bacillus蛋白质表达哺乳动物细胞蛋白质表达昆虫细胞蛋白质合成(Clontech) 无细胞蛋白质合成系统 Protein Refolding
蛋白质纯化、分析和检测

Capturem新型膜技术应用蛋白质样品制备 His标签融合蛋白质纯化 GST标签融合蛋白质纯化生物素标签融合蛋白质纯化 DYKDDDDK标签融合蛋白质纯化 Myc标签融合蛋白质纯化抗体纯化蛋白质IP&Co-IP 糖/磷酸化蛋白质纯化蛋白质检测蛋白质电泳胶染色蛋白质定量蛋白酶（His标签去除）蛋白酶（氨基酸序列分析）
基因导入（Virus、Vectors）

病毒基因传递系统选择向导重组慢病毒(Lentivirus)制品重组逆转录病毒(Retrovirus)制品重组腺相关病毒(AAV)制品重组腺病毒(Adenovirus)制品哺乳动物细胞用载体酵母、丝状真菌用载体植物用载体
转染试剂

Xfect转染试剂选择向导质粒转染试剂 RNA转染试剂 Protein转染试剂
干细胞研究相关制品

干细胞学习中心干细胞基因操作 (Cell reprogramming) 细胞 (Cell) 细胞培养产品 (Cell culture) 抗体 (Antibodies) 分化试剂盒和多能性监测 (Pluripotency and Differentiation ) 基因编辑（Gene Editing）
表观遗传学相关制品

甲基化DNA富集相关制品 PCR/qPCR相关制品 Control Genome DNA 甲基化DNA相关酶制品亚硫酸氢盐处理相关制品
基因组编辑相关制品

CRISPR/Cas9 Cre重组酶基因敲入用长单链DNA制备
荧光蛋白质 & 报告系统

荧光蛋白质按颜色、名称分类荧光蛋白质按用途分类荧光蛋白质相关制品报告系统
抗体 & ELISA & 细胞信号转导

细胞增殖、细胞毒性测定细胞凋亡（Takara）细胞凋亡（Clontech） EIA试剂盒（Takara）免疫染色关联制品细胞信号转导（Clontech）酶活性测定试剂盒脂肪细胞、骨细胞分化试剂抗体（Takara）
细胞 & 培养相关制品

细胞培养相关制品细胞生物学检测试剂细胞解冻仪器
microRNA & RNAi研究相关制品

RNA合成提取及纯化制品 microRNA定量PCR miRNA表达 Small RNA克隆 shRNA表达检测合成siRNA定量 RNAi相关制品
Library & cDNA & RNA

Human cDNA libraries series Mouse cDNA libraries series Rat cDNA libraries series cDNA、Genome DNA Total RNA & Poly A⁺ RNA
糖工学相关制品

糖工学酶糖工学试剂盒 Glycosphingolipid解析试剂
应用检测（食品-环境-人）

活菌DNA检测相关制品防污染相关制品食物中毒检测（PCR）食物中毒检测 (Real Time PCR) 食物中毒检测 (按Target选择) 肉种鉴定相关制品水质检测人感染症检测菌种鉴定支原体检测
仪器相关制品

PCR仪器支持中心 Q-PCR仪 E-PCR仪电泳仪器产品
Clontech相关组分信息表

Clontech相关组分信息表

技术服务信息

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人iPS细胞基因编辑解决方案，Disease model in a dish

人诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs) 具备多向分化潜能和自我更新能力，同时可保留细胞来源个体的遗传背景。结合CRISPR/Cas9基因编辑技术，可以打造肝脏、心脏、神经等多种疾病模型，进行遗传变异的功能性研究以及更深远的再生医学研究。
Takara提供多款工具，针对性解决人iPS细胞基因编辑关键操作和挑战。

■ 关键操作之基因编辑人iPS细胞

CRISPR/Cas9基因编辑技术的两个组件（Cas9核酸酶和sgRNA）可以通过多种方法导入至靶细胞，如载体表达系统，RNA转染系统，或直接导入Cas9/sgRNA核糖核蛋白(RNP)复合物(Sander and Joung 2014)。与载体表达系统相比，直接导入Cas9/sgRNA RNPs更加快速，同时脱靶效应的可能性更小 (Kim et al. 2014)。

对于难转染的人iPS细胞，Takara提供两种Cas9/sgRNA RNPs导入方法，电穿孔Electroporation法或纳米囊泡Gesicle法，实现高效的、低脱靶效应的基因编辑。

一、电穿孔法基因编辑
· Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code No. 632635; 1 kit)
· Guide-it™ Recombinant Cas9 (Electroporation-Ready) (Code No. 632641; 100 μg)
二、Gesicle法基因编辑
· Guide-it™ CRISPR/Cas9 Gesicle Production System (Code No. 632613；1 kit)

■ 关键操作之获得所需突变的单细胞克隆

一旦Cas9/sgRNA RNP复合物被导入, 为了分离和筛选感兴趣的基因型，需要进一步分离成单细胞并扩增为单克隆。传统的人iPS 细胞以集落状生长和传代，不利于进行单细胞分离和单细胞培养，为基因编辑后建立单克隆增加了难度。

Takara旗下的DEF-CS^™ 培养系统（Asplund et al. 2016），支持人多能干细胞无血清，无饲养层，单层均匀、非集落状生长，规避了集落状生长带来的挑战，允许单细胞传代和促进接种后的单细胞存活和扩增，更利于获得基因编辑后感兴趣突变的单克隆。建议使用Y30010进行人iPS细胞常规培养，使用Y30021进行人iPS细胞单克隆培养。

Code No.	Product	Size
Y30010	Cellartis^®DEF-CS^™ 500 Culture System	1 Kit
Y30021	Cellartis^®iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS^™ Culture Media Kit	1 Kit

参考文献：

· Asplund, A. et al. One Standardized Differentiation Procedure Robustly Generates Homogenous Hepatocyte Cultures Displaying Metabolic Diversity from a Large Panel of Human Pluripotent Stem Cells. Stem Cell Rev. Reports 12, 90–104 (2016).
· Kim, S., Kim, D., Cho, S. W., Kim, J. & Kim, J.-S. Highly efficient RNA-guided genome editing in human cells via delivery of purified Cas9 ribonucleoproteins. Genome Res. 24, 1012–9 (2014).
· Sander, J.-D. & Joung, J.-K. CRISPR-Cas9 systems for genomic editing, regulation and targeting. Nat. Biotechnol. 32, 347–55 (2014).

实验案例：

1. 在人iPS细胞的内源性基因插入AcGFP1标签
Tagging an endogenous gene with AcGFP1 in hiPS cells